摘要: 以驯化致弱的犬瘟热病毒小熊猫株(Canine distemper virus,CDV)为模板,构建犬瘟热病毒感染性cDNA克隆。对其全基因组序列测定后,用RT-PCR 的方法获得组成全长基因的7 个片段,通过酶切、拼接将7 段CDVcDNA 序列插入到真核表达载体pCI 的MCS 上,构建犬瘟热病毒小熊猫株的全长cDNA 质粒(pCI-CDV-LP),同时分别克隆CDV 小熊猫株N、P、L 蛋白ORF 构建三个辅助质粒。酶切鉴定和序列测定表明,pCI 载体中插入的核酶及CDV cDNA 序列正确无误,使用转染试剂Lipofectamine TM 2000 将全长质粒和三个辅助质粒共转染中国仓鼠肾细胞(BSR),经RT-PCR、间接免疫荧光和病毒感染VERO-SLAM 细胞试验鉴定,成功拯救出CDV 小熊猫株,显示CDV 小熊猫株反向遗传系统构建完成,为犬瘟热病毒致病机理及免疫研究奠定基础。