李红阁,赵新全,常智杰, 任芳丽
LI Hongge,ZHAO Xinquan,CHANG Zhijie,REN Fangli
摘要: 高原鼠兔生活在青藏高原海拔3 000 ~ 5 000 m的区域,具有极强的低温、低氧耐受能力。低氧诱导因子-1(HIF-1)是一种由HIF-1α 和HIF-1β 组成的异源二聚体转录因子,在生物体的低氧适应性调节中起着关键作用。低氧主要通过调节HIF-1α 蛋白水平来影响HIF-1α 的转录活性。本研究用DNA 重组技术将高原鼠兔HIF-1α(pHIF-1α)(538/822)编码基因序列亚克隆至原核表达载体PGEX-4T-1 中,并在大肠杆菌BL21 菌株中进行高效诱导表达,获得可溶性表达产物。将纯化后的GST-pHIF-1α (538 /822)融合蛋白作为免疫原免疫家兔制备多克隆抗体。免疫印迹结果表明,制备的抗体能够识别高原鼠兔HIF-1α 蛋白。进一步利用亲和纯化的方法对此多克隆抗体进行了纯化。免疫印迹和免疫染色的结果表明,纯化的抗体可以用于检测外源以及内源的高原鼠兔HIF-1α 蛋白的表达和定位,为后续的研究提供了重要的实验材料。