海南坡鹿CDC42 cDNA 的克隆、原核表达及纯化

海南坡鹿CDC42 cDNA 的克隆、原核表达及纯化

张巍, 陈品林, 雷明, 成鹰, 陈欢, 曹献英, 杜丽, 张冬琳, 刘涛, 许世英, 符运南, 祁超, 王凤阳

海南大学农学院,海口市动物基因工程重点实验室,海口 570228

出版日期:2011-03-02 发布日期:2011-03-02

Cloning and prokaryotic expression and purification of CDC42 cDNA from Hainan Eld’s Deer

ZHANG Wei,CHEN Pinlin,LEI Ming,CHENG Ying,CHEN Huan,CAO Xianying,DU Li,ZHANG Donglin,LIU Tao,XU Shiying,FU Yunnan,QI Chao,WANG Fengyang

College of Agriculture,Hainan University,Animal Genetic Engineering Key Laboratory of Haikou,Haikou 570228,China

Online:2011-03-02 Published:2011-03-02

摘要/Abstract

摘要： 应用RT - PCR 方法对海南坡鹿细胞分裂周期蛋白42 (Cell division cycle 42,CDC42)编码区进行扩增,
将扩增产物与PET - 42a 载体连接,重组质粒鉴定正确后,进行生物信息学分析;构建pET42a - hdCDC42 表达
载体,经IPTG 诱导表达,将表达产物进行SDS - PAGE、可溶性分析、纯化及Western blot 分析。结果表明,海
南坡鹿CDC42 含有1 个576 bp 的开放阅读框,编码191 个氨基酸。经IPTG 诱导表达后,得到一个带有His - tag
和GST 的约54 kD 的融合蛋白,用抗His 单克隆抗体进行Western blot,得到一条约54 kD 的特异性抗体结合带,
表明海南坡鹿CDC42 原核表达载体成功构建并表达。

关键词: 海南坡鹿, CDC42, 克隆, 原核表达, 纯化

Abstract: Cell division cycle 42 (CDC42)cDNA of Hainan Eld’s Deer (Cervus eldi hainanus) was amplified by RT -PCR, subcloned into a pET42a vector and transformed into E. coli host cells. Protein expression was induced by IPTG and analyzed by SDS - PAGE and Western blot. The results showed that the CDC42 cDNA from Hainan Eld’s Deer (hdCDC42)contained a 576 bp ORF encoding 191 amino acids. A 54 kD fusion protein with a Histag was induced by IPTG and confirmed by Western blot using anti His-tag monoclonal antibody. The results indicate that prokaryotic expression vector of CDC42 from Hainan Eld’s Deer was constructed and expressed successfully.

Key words: CDC42, Cloning, Expression, Hainan Eld’s Deer (Cervus eldi hainanus), Purification

张巍, 陈品林, 雷明, 成鹰, 陈欢, 曹献英, 杜丽, 张冬琳, 刘涛, 许世英, 符运南, 祁超, 王凤阳. 海南坡鹿CDC42 cDNA 的克隆、原核表达及纯化[J]. .

ZHANG Wei,CHEN Pinlin,LEI Ming,CHENG Ying,CHEN Huan,CAO Xianying,DU Li,ZHANG Donglin,LIU Tao,XU Shiying,FU Yunnan,QI Chao,WANG Fengyang. Cloning and prokaryotic expression and purification of CDC42 cDNA from Hainan Eld’s Deer[J]. .

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