兽类学报 ›› 2015, Vol. 35 ›› Issue (1): 102-109.
于永乐 张传美 杨海燕 杨瑞梅 张洪亮 单虎
YU Yongle, ZHANG Chuanmei, YANG Haiyan, YANG Ruimei, ZHANG Hongliang, SHAN Hu
摘要: 根据GenBank 登录的水貂肠炎病毒(MEV)VP2 蛋白基因的保守序列设计了1 对特异性引物,经PCR 扩增出146 bp 的目的片段,并克隆到pMD 18 - T 载体上,提取重组质粒经PCR 及测序鉴定正确后,以10 倍梯度稀释质粒作为阳性标准品,绘制荧光定量标准曲线,以此建立一种基于SYBR Green 荧光染料的定量PCR 特异性检测水貂肠炎病毒的方法。结果表明:该方法对MEV 有很好的特异性,检测灵敏度为34 拷贝/ μL,且重复性试验变异系数均小于2% 。临床检测中,在80 份样品中检测到30 份阳性样品,高于普通PCR 和电镜观察方法的检出率。该方法的建立实现了对MEV 临床早期快速诊断和定量分析,为毛皮动物MEV 的防控提供了可靠的检测方法。