麋鹿血液cDNA 文库的构建

麋鹿血液cDNA 文库的构建

吴海龙, 万秋红, 方盛国, 张林源, 夏经世, 钟震宇

浙江大学生命科学学院濒危野生动物保护遗传与繁殖教育部重点实验室,国家濒危野生动植物种质基因保护中心,杭州

出版日期:2007-12-11 发布日期:2008-07-07

Construction of a cDNA library of blood of Elaphurus davidianus

WU Hailong, WAN Qiuhong, FANG Shengguo, ZHANG Linyuan, XIA Jinshi, ZHONG Zhenyu

Online:2007-12-11 Published:2008-07-07

摘要/Abstract

摘要： 为分离出MHCⅠ、Ⅱ基因,利用TRIzol 试剂从麋鹿血液组织中提取总RNA,经mRNA 纯化试剂盒纯化
后,根据Stratagene 公司的cDNA 文库构建系统构建了麋鹿血液组织的cDNA 文库。初始文库滴度为1.96 ×106 pfu/ ml,总库容为1.96 ×106 个独立克隆;cDNA 插入片段平均长度约为1.0 kb;重组率为95.6 % 。文库各项指标均达标准经典cDNA 文库的基本要求。利用本实验室设计的可扩增MHCⅡ类DQA 基因第二外显子的引物检测扩增后的文库,得到了特异性非常好的目标条带,说明本文所建文库可以用于麋鹿MHC 相关基因的分离。

关键词: 麋鹿, 血液组织, cDNA 文库, 主要组织相容性复合体

Abstract: Total RNA was extracted from the blood of Père David's deer (Elaphurus avidianus)with Trizol reagent and mRNA was further purified using a purifying kit for mRNA. According to the manual of cDNA Synthesis system from Stratagene, we constructed a cDNA library of the blood of Père David's deer. Our aim was to isolate some genes of major histocompatibility complex (MHC) for the deer. The cDNA library has a capacity of 1.96 ×106 clones, and 95.6 % of them are recombinant clones. The average size of the inserted cDNA fragments is about 1.0 kb,which meets the requirement of a standard cDNA library. The second exon of DQA gene (193 bp) was successfully amplified from the library using a primer pair designed by our lab. These results show that the blood cDNA library constructed is useful for isolation of MHC
genes of Père David's deer.

Key words: Blood, cDNA library, Major histocompatibility complex, Père David's deer (Elaphurus davidianus)

吴海龙, 万秋红, 方盛国, 张林源, 夏经世, 钟震宇. 麋鹿血液cDNA 文库的构建[J]. .

WU Hailong, WAN Qiuhong, FANG Shengguo, ZHANG Linyuan, XIA Jinshi, ZHONG Zhenyu. Construction of a cDNA library of blood of Elaphurus davidianus[J]. .

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