成鹰,杜丽,王凤阳,刘涛, 李治深, 许世英, 符运南,林贤梅, 吴科榜, 林杰材, 满初日嘎
CHENG Ying,DU Li,WANG Fengyang,LIU Tao,LI Zhishen,XU Shiying,FU Yunnan,LIN Xianmei,WU Kebang,LIN Jiecai,MANCHU Riga
摘要: 采用RT-PCR 和RACE 方法扩增海南坡鹿热休克转录调节因子1 (Heat shock transcription factor 1,HSF1) cDNA 全长,将扩增产物与pMD20-T 载体连接,重组质粒经PCR、酶切鉴定后测序并进行生物信息学分析;构建pET28a-hdHSF1 表达载体,经IPTG 诱导表达后,进行SDS-PAGE 和Western blot 分析。结果显示,海南坡鹿HSF1cDNA 全长为2 036 bp,含有1 个1 578 bp 的开放阅读框,编码525 个氨基酸。经生物信息学分析,HSF1 是一个等电点为4.93 的亲水性蛋白。经IPTG 诱导表达后,得到一个带组氨酸标签的约62 kD 的融合蛋白,用抗His 单克隆抗体进行Western blot,得到一条约62 kD 特异性抗体结合带,表明海南坡鹿HSF1 原核表达载体成功构建并表达。